폴리아크릴아미드 겔 전기영동 시 주의사항

· 폴리아크릴아미드젤은 아크릴아미드 단량체, 중합 시작 물질, 촉매, 염 및 완충액 혼합물을 함께 사용해야 합니다.

· 아크릴아미드BIS(N,N'-메틸렌 더블 아크릴아미드)는 단량체 형태 겔 매트릭스이다.

·과황산암모늄 접착제 중합 공정을 시작합니다. 접착제를 제조하려면 물에 용해된 10% 과황산암모늄 용액이 필요합니다. 대부분의 정보는 적극적인 사용이 필요함을 나타냅니다. 그러나 10% 용액은 상당한 활성 손실 없이 몇 주 동안 4℃에 놓아둘 수 있습니다. 10ml로 만든 후 접착제가 뭉치지 않으면 폐기합니다.

팁:아크릴아미드시퀀싱 접착제와 단백질 접착제는 동일하지 않습니다. 미리 만들어진 아크릴아미드: BIS 용액을 사용하는 경우 올바른 병을 구입하십시오.

· TEMED(N, N, N', N'-테트라메틸 에틸렌디아민)는 갈색병에 담긴 촉매제이며 냉장고에 보관됩니다. 접착제를 붓기 직전에 추가하십시오.

· 폴리아크릴아미드 전기영동에 사용된 유리는 매번 세척 전후에 세척해야 합니다. 전기영동 후 뜨거운 비눗물에 부드러운 솔과 천을 사용하여 세척하고 증류수로 헹구고 건조시킵니다.

· 중공 폴리머는 습기와 먼지가 발생할 수 있습니다. 전기영동 전 유리판을 유리세정제로 깨끗이 닦은 후 부드러운 솔로 닦아주세요. 증류수로 세척하고 종이 타월로 완전히 건조시킵니다. 종이로 닦기 전에 70% 에탄올로 헹구면 깨끗하고 건조 속도가 빨라집니다. BIS, 물, 완충액, 과황산암모늄, TEMED 등 아크릴아미드 샘플을 연속적으로 추가합니다. 잘 흔들어서 바로 부어주세요.

중합 전에 폴리아크릴아미드를 탈기할 필요는 없습니다. (기포를 제거하기 위해 아크릴아미드를 진공상태에 두곤 했는데, 산소가 중합을 방해하기 때문입니다.)

수평 접착점 샘플 팁.

· 하단 상자에 검정색 종이 한 장을 넣고 검정색 배경을 사용하여 샘플 구멍을 만들어 더 명확하게 볼 수 있습니다.
· 콜로이드 바로 위에 완충액이 채워진 접착제 탱크.
· 가장자리에 빛이 있으면 불을 켜고 빛이 콜로이드로 빛나도록 하세요. 샘플을 피펫에 그립니다.
· 자동 피펫팅 장치를 사용합니다.
· 10-200 mu에서 1개의 액체 이동 지점을 시료의 대부분 지점에서 사용할 수 있습니다. 매우 작은 샘플 구멍(10μ1 미만)의 경우 시퀀싱 접착제에 사용되는 긴 피펫 헤드가 더 편리합니다.

· 피펫팅은 샘플에 담그고 천천히 움직이는 유체를 흡입합니다. 샘플은 글리세린으로 끈적끈적해 보일 수 있으며, 빠른 펌핑으로 인해 기포가 피펫 헤드로 유입될 수 있습니다.

· 피펫팅 헤드를 흡입한 후 샘플은 파이프 가장자리에서 유체 헤드를 부드럽게 움직이거나 종이를 닦아 액적 외부의 액체 헤드를 빨아들입니다. 샘플을 빨지 않도록 주의하세요.

샘플 구멍에 샘플을 넣습니다.

· 피펫팅 장치는 약간의 압력을 유지하여 샘플이 오버플로된 액체 헤드를 약간 움직이게 합니다.
· 버퍼에 삽입된 피펫팅 헤드는 스폿 구멍보다 약간 높게 양압을 유지합니다. 피펫 끝부분을 작은 구멍에 삽입할 수 있습니다.
· 천천히 그리고 꾸준히 샘플을 꺼냅니다. 피펫 팁은 포인트 샘플 구멍 위에 배치되고 샘플은 구멍에 가라앉습니다. 샘플을 밀어넣는 대신 샘플 구멍을 채우도록 싱크대를 두십시오.
· 액체 헤드가 있는 샘플의 마지막 한 방울이 지나면 액체는 두 번째 다리로 이동하고 천천히 액체 이동을 올리고 버퍼 밖으로 이동합니다.

수직 접착제 샘플링을 수행하는 방법은 무엇입니까?

· 두 개의 유리 조각 사이에 형성된 수직 접착점 샘플 구멍. 매우 얇은 접착제에서는 피펫 헤드가 두 개의 유리판 사이에 삽입될 수도 없습니다. 글리세린을 조심하세요! 피펫 헤드를 샘플 구멍 위에 놓으면 샘플이 구멍에 가라앉습니다.
· 포인트 샘플 전, 반드시 폴리프로필렌 아실겔 샘플 구멍의 수직 포인트를 깨끗하게 헹구어 놓으십시오. 시료 구멍 바닥에 나타날 수 있는 중합되지 않은 아크릴아미드와 물을 씻어내세요. 물은 샘플 구멍을 훨씬 더 작게 만들 수 있습니다. 25ml 또는 50ml 주사기와 18게이지 바늘을 사용합니다. 전기영동 완충액을 붓고 샘플 구멍을 조심스럽게 씻어냅니다.
· 샘플 구멍이 잘 보이지 않을 수 있지만 나머지는 쉽습니다. 구멍이 너무 많으면 브로모페놀 블루로 샘플 완충액을 테스트할 수 있습니다.