폴리아크릴아마이드 겔 전기영동 시 주의사항

· 폴리아크릴아마이드겔은 아크릴아마이드 단량체, 중합 개시 물질, 촉매, 그리고 염과 완충액 혼합물로 이루어져야 합니다.

· 아크릴아마이드그리고 BIS(N, N'-메틸렌 더블 아크릴아마이드)는 단량체 형태의 겔 매트릭스입니다.

· 과황산암모늄은 접착제 중합 과정을 시작합니다. 접착제를 제조하려면 물에 녹인 10% 과황산암모늄 용액이 필요합니다. 대부분의 정보는 활성 사용의 필요성을 시사했습니다. 그러나 10% 용액은 4°C에서 몇 주 동안 활성 손실 없이 보관할 수 있습니다. 최대 10ml까지 제조한 후 접착제가 응집되지 않으면 폐기하십시오.

팁: 백분율아크릴아마이드시퀀싱 접착제와 단백질 접착제는 동일하지 않습니다. 기성품인 아크릴아마이드: BIS 용액을 사용하는 경우, 반드시 적합한 용기를 사용하세요.

· TEMED(N, N, N', N'-테트라메틸에틸렌디아민)는 촉매제입니다. 갈색 병에 담아 냉장고에 보관하세요. 접착제를 붓기 직전에 첨가하세요.

· 폴리아크릴아미드 전기영동에 사용된 유리는 매번 실험 전후에 세척해야 합니다. 전기영동 후에는 부드러운 솔과 천을 사용하여 뜨거운 비눗물에 세척하고, 증류수로 헹군 후 건조시킵니다.

· 습기와 먼지는 중공 중합체의 손상을 유발할 수 있습니다. 전기영동 전에 유리판을 유리 세정제로 깨끗이 닦고 부드러운 솔로 닦으십시오. 증류수로 세척하고 종이 천으로 완전히 말리십시오. 종이 천으로 닦기 전에 70% 에탄올로 헹구면 세척 효과가 좋고 건조 속도도 빨라집니다. 아크릴아마이드 시료를 순서대로 첨가하십시오: BIS, 물, 완충액, 과황산암모늄, TEMED. 잘 흔들어 준 후 즉시 붓습니다.

중합 전에 폴리아크릴아미드의 가스를 제거할 필요는 없습니다. (산소가 중합을 방해하기 때문에 아크릴아미드를 진공 상태로 두어 기포를 제거했습니다.)

수평 접착 포인트 샘플 팁.

· 검은색 종이 한 장을 상자의 아래쪽에 놓고, 검은색 배경을 넣어 샘플 구멍을 만들어 더 명확하게 볼 수 있도록 합니다.
· 콜로이드 바로 위에 접착제 탱크로 채워진 완충액.
· 가장자리에 빛이 있으면 빛을 켜서 콜로이드가 빛나도록 합니다. 샘플을 피펫에 넣습니다.
· 자동 피펫팅 장치를 사용합니다.
· 10~200μl의 액체 이동 지점은 샘플의 대부분 지점에서 사용할 수 있습니다. 매우 작은 샘플 구멍(10μl 미만)의 경우, 시퀀싱 접착제에 사용되는 긴 피펫 헤드가 더 편리합니다.

· 피펫팅은 시료에 담근 채 천천히 움직이는 액체를 흡입하는 방식으로 진행됩니다. 시료가 글리세린으로 인해 끈적끈적해 보일 수 있으며, 빠른 펌핑으로 인해 피펫 헤드에 기포가 유입될 수 있습니다.

· 피펫팅 헤드를 흡입한 후, 액체 헤드를 파이프 가장자리에 살짝 대고 움직이거나 종이를 닦아 액체 헤드를 바깥쪽으로 밀어내어 물방울을 흡입합니다. 샘플을 흡입하지 않도록 주의하십시오.

샘플을 샘플 구멍에 넣으세요

· 피펫팅 장치는 약간의 압력을 유지하여 샘플이 약간 움직이도록 하여 액체 헤드가 넘치도록 합니다.
· 피펫 헤드를 버퍼에 삽입하고, 스팟 홀보다 약간 높은 위치에 두어 양압을 유지합니다. 피펫 끝은 작은 구멍에 삽입할 수 있습니다.
· 천천히 그리고 꾸준히 샘플을 꺼냅니다. 피펫 팁을 샘플 구멍 위에 놓으면 샘플이 구멍 안으로 가라앉습니다. 샘플 구멍을 누르지 말고, 샘플이 가라앉도록 하여 구멍을 채웁니다.
· 액체 헤드가 있는 샘플의 마지막 한 방울이 떨어지면 액체는 두 번째 다리로 이동하고 천천히 액체를 들어 올려 버퍼에서 빠져나갑니다.

수직 접착제 샘플링은 어떻게 하나요?

· 두 유리판 사이에 수직 접착점 샘플 구멍이 형성되어 있습니다. 매우 얇은 접착제의 경우, 피펫 헤드를 두 유리판 사이에도 삽입할 수 없습니다. 글리세린을 조심하세요! 피펫 헤드를 샘플 구멍 위에 놓으면 샘플이 구멍 안으로 가라앉습니다.
· 샘플을 채취하기 전에 폴리프로필렌 아실겔 샘플 구멍의 수직 지점을 깨끗이 헹구십시오. 중합되지 않은 아크릴아마이드와 샘플 구멍 바닥에 나타날 수 있는 물을 씻어내십시오. 물은 샘플 구멍을 상당히 작게 만들 수 있습니다. 25ml 또는 50ml 주사기와 18게이지 바늘을 사용하십시오. 전기영동 완충액을 붓고 샘플 구멍을 조심스럽게 세척하십시오.
· 샘플 구멍을 보기 어려울 수 있지만, 나머지는 쉽습니다. 구멍이 너무 많으면 브로모페놀 블루로 샘플 버퍼를 검사할 수 있습니다.